人白細胞分化抗原30(CD30)ELISA試劑盒實驗使用說明書

　　BS-0017人白細胞分化抗原30(CD30)ELISA試劑盒

　　以下是人白細胞分化抗原30(CD30) ELISA試劑盒的規(guī)范使用說明，本生整合了多個品牌試劑盒的通用操作流程與注意事項：

　　一、試劑盒組成?

　　核心組分?

　　預(yù)包被抗CD30抗體的96孔酶標(biāo)板(可拆分為48T/96T規(guī)格)?

　　凍干CD30標(biāo)準(zhǔn)品(濃度范圍：2.5–40 ng/L，需用標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液復(fù)溶)?

　　生物素標(biāo)記的抗CD30抗體(即用型)?

　　HRP標(biāo)記的親和素(即用型)?

　　TMB底物液(A液與B液需混合使用)及終止液(2N H?SO?)?

　　輔助試劑?

　　洗滌緩沖液(20×濃縮液，需按1:20稀釋)?

　　樣本稀釋液(用于血清/血漿預(yù)處理)?

　　二、樣本處理要求?

　　采集與保存?

　　血清/血漿?：全血靜置10-20分鐘后離心(2000–3000 rpm，20分鐘)，取上清分裝于-20℃保存，避免反復(fù)凍融?。

　　細胞上清/組織勻漿?：離心去除顆粒物后檢測，高濃度樣本需稀釋至標(biāo)準(zhǔn)曲線范圍內(nèi)?。

　　注意事項?

　　避免使用含NaN?的保存液，以免HRP活性?。

　　細菌污染的樣本可能導(dǎo)致假陽性，需嚴(yán)格無菌操作?。

　　三、實驗步驟?

　　標(biāo)準(zhǔn)品制備?

　　凍干標(biāo)準(zhǔn)品按說明書復(fù)溶(如0.5mL樣本稀釋液溶解)，梯度稀釋至5個濃度點(如40、20、10、5、2.5 ng/L)?。

　　加樣與孵育?

　　每孔加入100μL標(biāo)準(zhǔn)品/樣本，37℃孵育90分鐘?。

　　洗滌3次后，加入100μL生物素標(biāo)記抗體，37℃孵育60分鐘?。

　　再次洗滌，加入100μL HRP-親和素，37℃孵育30分鐘?。

　　顯色與終止?

　　每孔加入100μL TMB底物，避光顯色15–20分鐘(顏色由藍轉(zhuǎn)黃)?。

　　加入50μL終止液，顏色轉(zhuǎn)為黃色，10分鐘內(nèi)測定OD450nm值?。

　　四、結(jié)果計算?

　　以標(biāo)準(zhǔn)品濃度為橫坐標(biāo)、OD值為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，樣本濃度通過曲線方程計算?。

　　檢測靈敏度通常≤1.0 ng/L，批內(nèi)CV≤15%?。

　　五、常見問題處理?

　　問題? ?可能原因? ?解決方案?

　　顯色過弱 孵育時間不足/抗體失活 延長孵育時間或更換新鮮試劑?

　　背景偏高 洗滌不充分/底物污染 增加洗滌次數(shù)或更換底物?

　　標(biāo)準(zhǔn)曲線異常 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋錯誤 嚴(yán)格按梯度稀釋并短暫離心混勻?

　　六、注意事項?

　　試劑盒僅限科研使用，不可用于臨床診斷?。

　　操作時避免使用金屬器材接觸酶標(biāo)板，防止靜電干擾?。

　　未用完的酶標(biāo)板需密封保存于2–8℃，避免受潮?。

　　注：以上資料僅供參考，具體請咨詢技術(shù)老師或品牌供應(yīng)商。

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