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    Elisa實驗| 雙抗體夾心法ELISA實驗操作
    更新時間:2023-09-22瀏覽:1197次

      Elisa實驗| 雙抗體夾心法ELISA實驗操作


      一、標準品稀釋及樣品準備

      樣本離心4℃,1000Xg,5min

      標準品離心4℃,10000Xg,1min

      1mL稀釋液溶解標準品,靜置1-2min,取7支空EP管,每管加入500μL標準品&樣品稀釋液,靜置后標準品混勻,將液體離心至底部(800Xg,1min)

      取同體積標準品原液稀釋,渦旋混勻,依次倍比稀釋標準品,最后一管為空白

      二、酶標板拆分

      可按照實驗需求拆裝板條,讓板條松動并輕推底部,拆下板條防止在備用板框上,剩余板條防至鋁箔袋,封口存放。

      三、標準品及樣本點樣

      由低到高濃度,每孔100μL,懸空加入(建議均設置復孔)

      處理后樣品取上清溶液,懸空,每孔100μL,腹膜后標記。提前預熱,注意溫度,37℃孵育90min。


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      四、生物s化抗體工作液制備

      取適量生物素化抗體稀釋液,加入濃縮液,稀釋100倍后,顛倒混勻20次,待用。

      取出酶標板,勿觸摸板條底部,甩盡孔內液體后,拍干。將工作液倒入加樣槽,懸空垂直加入,100μL/孔,腹膜后標記,37℃孵育60min。

      五、1x洗液配制

      根據需求取雙蒸水適量,取25x濃縮洗滌液適量,加入燒杯,磁力攪拌器混勻5-10min。

      六、濃縮HRP酶結合物工作液制備

      取適量HRP酶結合物稀釋液,加入濃縮液,稀釋100倍后,顛倒混勻20次,備用

      取出酶標板,勿觸摸板條底部。輕撕覆膜,避免液體濺出。參數設定:洗滌次數3次、洗板條數12條、洗滌液量350μL/孔、震板5s。拍干液體,更換吸水紙。將工作液倒入加樣槽,懸空垂直加入,100μL/孔,腹膜后標記,37℃孵育30min。

      七、顯色

      平衡取出酶標板勿觸摸板條底部,輕撕覆膜,避免液體濺出,參數設定。洗滌次數5從,洗板條數12條,洗滌液量350μL/孔,震板5s。拍干液體,更換吸水紙。

      將底物溶液倒入加樣槽,懸空垂直加入,90μL/孔,腹膜后標記,37℃孵育15-30min。

      八、終止反應

      平衡取出酶標板,切勿觸摸板條底部,顯色后前四孔出現明顯藍色剃度。輕撕覆膜,避免液體濺出。懸空垂直加入,50μL/孔,加入終止液時可看到藍色立轉為黃色。

      九、數據處理

      輕輕擦拭板底,放入酶標儀中,上機操作。

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